动物抑郁行为实验专题丨慢性社会挫败模型的建立方法及注意事项对照组表型实验组

当前,慢性社交挫败压力由于其可靠性和可重复性而被广泛接受为抑郁症的有效模型。由于以下原因,社交失败范例已被证明是人类抑郁的良好模型:1)易感小鼠的抑郁表型(社交回避,快感不足,代谢变化等)。可以通过抗抑郁药的长期治疗来逆转,但不能通过急性给药来逆转。2)社会挫败压力会产生易感表型和适应性表型,这可用来解释抑郁症病理生理学中人类压力敏感性的个体差异。3)社交失败压力诱发的易感表型在大脑奖励电路中伴随遗传和表观遗传变化而持久。

二、设备及软件(建议)

三、慢性社交挫败应激模型的建立

(1)传统CSDS建模方法

该部分实验内容是参照了有关文献:KudryavtsevaNN,BakshtanovskayaIV,KoryakinaLA.SocialmodelofdepressioninmiceofC57BL/6Jstrain[J].PharmacolBiochemBehav,1991,38(2):315-320.

正式实验前,选取雄性C57小鼠(7周),随机分配成正常组和应激组,每组10只,对照组每2只一笼,其余均单笼饲养,给正常饮食饮水一周充分适应环境。当实验开始时,提前分离CD1雌鼠,取模型组C57小鼠一只,直接放入陌生雄性CD1小鼠(8-9周)饲养笼中,使C57小鼠遭受雄性CD1小鼠持续性攻击约5-10min;然后将两只小鼠用带有密集小孔的透明塑料隔板隔开,使两只小鼠彼此仍能互视和闻嗅但是无法接触,运用这种方法持续到下次进行攻击前为止,完成该过程后即为第一天应激。

第二天再将该C57鼠放入另一不同的CD1雄性鼠的笼中,使C57小鼠受到相同程度的应激;第三天再放入第三只CD1雄性鼠的笼中,同样使C57小鼠受到同样程度的应激。如此连续应激10天,并保证每天同一只C57小鼠受到不同CD1雄性鼠的攻击。在此期间,对照组和应激组C57小鼠均维持正常饮食饮水,而对照组则保持2只一笼,每天相互更换接触不同的小鼠。

(2)改进型慢性社交挫败应激(CSDS)

模型的建立CSDS模型的构建方法参照文献:GoldenSA,CovingtonHE3rd,BertonO,etal.Astandardizedprotocolforrepeatedsocialdefeatstressinmice[J].NatProtoc,2011,6(8):1183-1191.

将CD-1小鼠单笼饲养7d产生领地意识,C57BL/6小鼠4~5只饲养7d适应环境。首先筛选CD-1小鼠的攻击性,将C57BL/6小鼠置CD-1小鼠笼中3min,若CD-1小鼠发起攻击多于5且攻击潜伏期<1min,认为有攻击性,在3d中至少2次有攻击性,可作为模型中的攻击鼠。实验组(Sus)小鼠进行10d的CSDS,即将实验组C57BL/6小鼠连续10d放入CD-1小鼠笼中,被攻击5~10min后用一带孔透明亚克力板隔离24h,每天更换新的CD-1小鼠避免适应。10d后将实验组C57BL/6小鼠取出并单笼饲养。而非应激对照组(Con)为同周龄C57BL/6小鼠,每天与无攻击性C57BL/6小鼠接触5~10min后用相同的板隔离24h,每天更换新的C57BL/6小鼠。10d结束后将非应激对照组C57BL/6小鼠取出并单笼饲养。

四、CSDS模型的检测方法

10天连续应激结束后即开始行为学测试。根据糖水消耗,社会接触的行为学和悬尾测试的结果将C57小鼠分为正常组,抑郁敏感组,抑郁非敏感组。

(1)糖水偏好实验

糖水偏好测试是检测抑郁症快感缺失的经典方法。根据文献稍做修改。首先给予小鼠两瓶清水,24h后将其中一瓶换成1%蔗糖溶液,称重并记录两瓶质量,12h后交换瓶的位置避免方向偏好,经过24h测试后再次称重,糖水偏好系数为:糖水消耗质量/总消耗质量。

参考文献:LiuMY,YinCY,ZhuLJ,etal.Sucrosepreferencetestformeasurementofstress-inducedanhedoniainmice[J].NatProtoc,2018,13(7):1686-1698.

(2)社会互动实验/社会接触实验

(3)强迫游泳实验和悬尾实验

(4)高架十字迷宫实验

(5)Y迷宫实验

五、探讨

(1)CSDS引起小鼠生理指标改变

我们发现,在CSDS模型中经过10d的社交挫败应激之后,应激敏感组小鼠(n=23)的体质量与非应激对照组小鼠(n=20)相比显著减轻(P=0.002)。与此同时,对两组小鼠进行血糖监测时发现,随着社交挫败应激进行,敏感组小鼠的血糖逐渐增加。

(2)CSDS引起小鼠焦虑样行为

(3)CSDS导致小鼠抑郁样行为

我们借助糖水偏好实验、强迫游泳实验以及悬尾实验等评价动物抑郁样行为的经典行为学实验,对CSDS模型小鼠进行了系统研究。其中,糖水偏好实验反映小鼠是否出现快感缺失;强迫游泳以及悬尾实验反映小鼠是否存在绝望行为,这两点是抑郁症患者的经典行为改变。

THE END
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