本发明涉及生物提取技术领域，具体是涉及一种蓝莓原花青素生物提取方法。
背景技术：
蓝莓果实中含有丰富的原花青素营养成分，原花青素不仅具有良好的营养保健作用，还具有防止脑神经老化、强心、抗癌软化血管、增强人机体免疫等功能。原花青素的功效价值表现在：
(1)抗氧化与清除自由基：OPC由于其分子结构中有富电子的羟基部分，是优良的氢或中子的给予体，因此具有超强的抗氧化能力，能有效清除人体内的自由基。原花青素在体内体外都有抗氧化活性。
(2)保护心脑血管系统：原花青素对脑缺血再灌注损伤的保护作用明显；可抑制人类皮肤毛细血管内皮细胞的增殖，影响血管生成；具有明确的抗血小板聚集作用，抗血栓作用明显；降低血浆甘油三酯游离脂肪酸载脂蛋白B，改善餐后动脉粥样硬化风险指数；具有较强的调整血脂，促进胆固醇逆转运和加快脂质和胆固醇排泄，改善脂质代谢紊乱的作用。
(3)防治癌症：原花青素有抗肿瘤作用，对子宫颈癌，前列腺癌、结肠癌等许多癌症都有预防及治疗的作用。此外，原花青素还对皮肤癌、口腔癌、肝癌等癌症也有一定的作用。
(4)预防与治疗糖尿病：原花青素能够改善糖尿病状态的氧化形式，对胰岛素敏感细胞系的胰岛素样作用与抗氧化活性。
(5)抗炎作用：原花青素在内毒素刺激的巨噬细胞中作为抗炎剂，从而发挥抗炎的效应。
(6)胃溃疡损伤保护作用：原花青素可以抑制应激性胃溃疡的发生，抑制胃黏膜的分泌酸功能，同时降低胃蛋白酶的活性。
(7)保护肝脏作用：小剂量(50，100mg·L-1)原花青素能抑制乙醇和四氯化碳诱导的肝细胞损伤和刺激正常肝细胞增殖。
(8)抗辐射作用：原花青素可以降低射线照射肌肤的Fas蛋白表达积分，增加Bc1-2蛋白表达积分，使之接近正常皮肤。
(9)酶抑制作用：原花青素对多种酶都有抑制作用，它能有效的抑制体外胰脂肪酶的活性，其效应随聚合度增加而增强。
(10)其他作用：原花青素还具有抗突变、抗过敏、抗HIV病毒、抗抑郁、抗疲劳作用，治疗急性呼吸窘迫综合症，延缓听力的下降、促进毛发生长及镇痛作用。
技术实现要素：
针对现有技术中存在的技术问题，本发明的目的在于提供一种蓝莓原花青素生物提取方法，为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案为：
一种蓝莓原花青素生物提取方法，步骤如下：
1)提取：将浓度为35～75％、pH值为2.5～5.5的乙醇与蓝莓浆果果渣粉末以3～9：1的重量比例混合，加热回流提取1～2h，过滤并收集滤液和残渣，残渣再以相同的料液比与同浓度的酸化乙醇溶液混合，再次回流提取1～2h，过滤并收集滤液，合并两次的滤液；
2)除杂：将步骤1)所得合并滤液0～4℃低温下放置15～20h，然后过滤；
3)浓缩：将步骤2)所得滤液在55℃下减压蒸发浓缩10～12h；
4)超滤：将步骤3)所得浓缩液通过微孔滤膜(孔径可选择0.40um和0.20um)进行超滤处理，以除去细菌和大分子蛋白；
5)柱层析纯化：先将滤液以每小时1～3倍柱体积的速度流过大孔吸附树脂，然后用2～5倍柱体积的蒸馏水以相同的速度流过树脂，洗去大部分杂质，再用1～3柱体积的60～90％的乙醇溶液以相同速度流过树脂，将树脂上吸附的花色苷洗脱下来，收集洗脱液；
6)干燥：将洗脱液在55℃下减压蒸发浓缩进一步除去乙醇，最后在40～55℃真空环境中干燥。
本发明的蓝莓原花青素生物提取方法，其有益效果表现在：
本发明提出了一种蓝莓原花青素的生物提取方法，该方法依据不同的产品种类，可提取出纯度为25～51％的原花青素，该项技术是目前国内最先进的蓝莓原花青素提取技术。而且，与国外同类技术相比，还具有成本较低的优势。
附图说明
图1为本发明的蓝莓原花青素生物提取方法的流程图。
具体实施方式
为进一步描述本发明的蓝莓原花青素生物提取方法，下面结合附图对其作进一步说明。
实施例1
请参阅图1，一种蓝莓原花青素生物提取方法，步骤如下：
1)提取：将浓度为60％、pH值为4.5的乙醇与蓝莓浆果果渣粉末以5：1的重量比例混合，加热回流提取1.5h，过滤并收集滤液和残渣，残渣再以相同的料液比与同浓度的酸化乙醇溶液混合，再次回流提取1.5h，过滤并收集滤液，合并两次的滤液。
2)除杂：将步骤1)所得合并滤液2℃低温下放置18h，然后过滤。
3)浓缩：将步骤2)所得滤液在55℃下减压蒸发浓缩11h。
4)超滤：将步骤3)所得浓缩液通过微孔滤膜进行超滤处理，以除去细菌和大分子蛋白。
5)柱层析纯化：先将滤液以每小时2倍柱体积的速度流过大孔吸附树脂，然后用3倍柱体积的蒸馏水以相同的速度流过树脂，洗去大部分杂质，再用1柱体积的70％的乙醇溶液以相同速度流过树脂，将树脂上吸附的花色苷洗脱下来，收集洗脱液。
6)干燥：将洗脱液在55℃下减压蒸发浓缩进一步除去乙醇，最后在50℃真空环境中干燥，得到蓝莓原花青素，提取物中花色苷含量为48％。
实施例2
1)提取：将浓度为70％、pH值为3的乙醇与蓝莓浆果果渣粉末以8：1的重量比例混合，加热回流提取1.2h，过滤并收集滤液和残渣，残渣再以相同的料液比与同浓度的酸化乙醇溶液混合，再次回流提取1.2h，过滤并收集滤液，合并两次的滤液。
2)除杂：将步骤1)所得合并滤液3℃低温下放置16h，然后过滤。
3)浓缩：将步骤2)所得滤液在55℃下减压蒸发浓缩12h。
5)柱层析纯化：先将滤液以每小时1倍柱体积的速度流过大孔吸附树脂，然后用5倍柱体积的蒸馏水以相同的速度流过树脂，洗去大部分杂质，再用1柱体积的80％的乙醇溶液以相同速度流过树脂，将树脂上吸附的花色苷洗脱下来，收集洗脱液。
6)干燥：将洗脱液在55℃下减压蒸发浓缩进一步除去乙醇，最后在45℃真空环境中干燥，得到蓝莓原花青素，提取物中花色苷含量为35％。
实施例3
1)提取：将浓度为40％、pH值为5的乙醇与蓝莓浆果果渣粉末以4：1的重量比例混合，加热回流提取2h，过滤并收集滤液和残渣，残渣再以相同的料液比与同浓度的酸化乙醇溶液混合，再次回流提取2h，过滤并收集滤液，合并两次的滤液。
2)除杂：将步骤1)所得合并滤液1℃低温下放置19h，然后过滤。
3)浓缩：将步骤2)所得滤液在55℃下减压蒸发浓缩10h。
5)柱层析纯化：先将滤液以每小时3倍柱体积的速度流过大孔吸附树脂，然后用2倍柱体积的蒸馏水以相同的速度流过树脂，洗去大部分杂质，再用3柱体积的65％的乙醇溶液以相同速度流过树脂，将树脂上吸附的花色苷洗脱下来，收集洗脱液。
6)干燥：将洗脱液在55℃下减压蒸发浓缩进一步除去乙醇，最后在40～55℃真空环境中干燥，得到蓝莓原花青素，提取物中花色苷含量为38％。