FlowJoV10.7版本重点升级之一就是增殖分析平台（ProliferationPlatform）。今天，我们就跟随王老师一起来看一下升级后的平台所具备的精彩功能吧！
//1.细胞增殖分析的实验方法
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BDFlowJo
1.1CFSE检测：
CFSE是一种亲脂性染料，可被细胞膜吸收。细胞标记CFSE后再诱导增殖，分裂后的细胞将含半量的CFSE，如此可监控细胞分裂的数目。
1.2VPD450检测：
BD生物科学的BDHorizonVPD450是一种非荧光的酯化染料，同样可以被吸收进入细胞。染料一旦进入细胞内部，酯酶会切割酯基，将染料变成细胞内的荧光产品。随着细胞的复制，细胞内的染料数量逐渐减少，形成了特征的图案。由此，我们可以采用多色流式技术从有限的样品量中获得更多的数据。
1.3BrdU检测：
Brdu是5-溴脱氧尿嘧啶核苷，BrdU可代替胸腺嘧啶渗入DNA的合成，BrdU荧光抗体检测渗入量，反映细胞增殖情况。此外Brdu可以在分析细胞周期时让S期更为精准。
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//2.FlowJo细胞增殖分析平台
2.1确定“第0代”峰
增殖实验通常将使用未刺激的样品开始分析，以确定“第0代”峰。第0代高峰代表未分裂的细胞，在增殖实验中收集的样本中应该有相对一致的强度和CV。在增殖实验中，在未受刺激峰周围画一个线性门门来设置“0代”峰。
2.3数据自动分析和手动微调
FlowJo首先会拟合出代表该群体的最优峰比和CV。这些可以手动调整和修复，以便它们在扩散分析中保持一致。还需要调整峰值的数量，以表示分析中出现的峰值的数量。通常，FlowJo将设置一个接近预期0.5%的峰值比率。预计细胞每分裂一次，两个子代细胞中的每一个都会有一半的染色量，因此它们的信号强度也会减半。
2.4自动生成每个增殖峰的细胞门
“CreateGates”按钮可以用来快速地在代表每个增殖峰的细胞群上创建门。
2.5图像选项优化结果图
图形选项通过添加峰值数或DrawModelSum来影响增殖显示，DrawModelSum将增殖峰值的重叠相加，创建一个类似于原始数据的形状。
2.6增殖统计数据获得
2.7数据结果导出
2.8增殖数据定义
DivisionIndex：分裂指数是指原始细胞群中细胞分裂的平均次数。即使对于从未分裂的细胞也是平均水平。（例如：包括未分裂的细胞峰)。
ProliferationIndex：增殖指数是细胞分裂的总数除以进入分裂的细胞数。增殖指数只考虑了至少经历过一次分裂的细胞，也就是说，只有增殖的细胞才反映在增殖指数中。这是一个很有用的进行样本间比较的值，因为它只考虑增殖的细胞。增殖指数更真实地反映了样本中增殖细胞的生物学特性;分裂指数反映了整个样本等状况。
PeakCV：增殖峰CV是峰的变异系数。所有峰值的CV值都相同。通常情况下，这个数字是4-7%。
Peakratio：增殖峰比率是后续峰之间的荧光比率。例如：0.5表示n峰的荧光量是n-1峰的一半。比值>0.5是没有生物学意义的，通常出现在logamp不是很好。所以该值应该接近0.5。
2.9增殖数据案例分析
举例：作为增殖指数和分裂指数如何计算的例子，如下:
G0=15888
G1=32922
G2=1364
G3=897
*培养开始时的细胞数:15888+(32922/2)+(13647/4)+(897/8)=35872.875
*分裂细胞总数:(32922/2)*1+(13647/4)*2+(897/8)*3=23620.875
*进入分裂的细胞数:35872.875-15888=19984.875
*分裂指数:23620.875/35872.875=0.66
*增殖指数:23620.875/19984.875=1.18
如果模型对数据拟合不理想，可以通过调整模型参数得到较好的拟合模型。
与FlowJo中的所有其他平台一样，增殖node可以通过拖动应用于一组样本。每一代都可以双击node打开图表单独分析。
-InterpretationofCellularProliferationData:AvoidthePanglossian.MarioRoederer,CytometryPartA,79A:95101,2011
-AssessingAntigen-SpecificProliferationandCytokineResponsesUsingFlowCytometry.AllsoppandLanghorne,EditedbyDeniseDoolan,MalariaMethodsandProtocol,p.409
-Antigen/Mitogen-StimulatedLymphocyteProliferation.Whiteside,MeasuringImmunity,Chpt.31p.364
-UseofCell-TrackingDyestoDetermineProliferationPrecursorFrequenciesofAntigen-SpecificTCells.Givan,Fisher,Waugh,Bercovici,Wallace.FlowCytometryProtocols2ndEd.p.109
-ProliferationAssaysBasedonBrdUIncorporationorCFSELabeling.Maecker,ImmunotherapyofCancer,Disis,p.62
-MonitoringTCellProliferation.Hodgkin,Hawkins,Hasbold,Gett,Deenick,Todd,Hommel.AnalyzingTCellResponsesByDirkNagorsen,FrancescoM.Marincola,p.122
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以上就是王老师为大家带来的FlowJo增殖分析平台全面的全面解析，希望能够给每一位流式工作者带来帮助。最新升级版FlowJo增殖分析平台平台尽在V10.7版本，快来下载体验吧！
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