实验方法原理聚合梅链式反应(polymerasechainreaction)即PCR技术,是一种在体外快速扩增特定基因或DNA序列的方法,故又称基因的体外扩增法。PCR技术已成为分子生物学研究中使用最多,最广泛的手段之一,而引物设计是PCR技术中至关重要的一环,使用不合适的PCR引物容易导致实
引物延伸分析(primerextensionanalysis)主要用于mRNA5′端作图。poly(A)+RNA首先与过量5′端标记的且与靶RNA互补的单链寡核苷酸引物杂交,然后用反转录酶延伸这个引物。产生的cDNA与RNA模板互补且长度与引物5′端和RNA5′端之间的距离相等。该法在mRN
引物在溶解前,室温状态下都可以长期保存。使用pH7.5-8.0的TE缓冲液溶解引物,在-20℃可以保存两个月甚至半年以上,-4℃保存两周一般也没有问题。不建议使用蒸馏水溶解引物,因为有些蒸馏水的pH值比较低(pH4-5),引物在这种条件下不稳定。另外需要提醒的是收到引物后一定先离心,将引物粉末收集于
1.引物是如何合成的?目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。DNA合成仪有很多种,主要都是由ABI/PE公司生产,而Bioneer自行研制的ZL384并行高通量DNA合成仪,可实现99%的高合成率。无论采用什么机器合成,合成的原理都相同,主要差别在于合成产率的高低,试剂消耗量的不同和
①引物长度:15-30bp,常用为20bp左右。②引物扩增跨度:以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC最好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。④避免引物内
引物在溶解前,室温状态下都可以长期保存。使用pH7.5-8.0的TE缓冲液溶解引物,在-20℃可以保存两个月甚至半年以上,-4℃保存两周一般也没有问题。不建议使用蒸馏水溶解引物,因为有些蒸馏水的pH值比较低(pH4-5),引物在这种条件下不稳定。另外需要提醒的是收到引物后一定先离心,
储备液一般是100uM,也有稀释成10uM的。反正做PCR的最终其工作液终浓度范围是0.2μmol/L左右。我一般把引物稀释成10uM,25微升PCR体系一般加0.4-1.0微升的引物。
一般由公司合成好的引物,最终发货的都是干粉形式。由于干粉是很细微的干燥粉末,肉眼几乎不可见,同时又很容易飞扬起来。所以在接到引物管以后,切记不要急于打开管盖。而是要先保持盖住状态、把管子放到离心机里做短暂离心,使干粉收集到管底。然后才可开盖、进行下一步的溶解。
开始之前:其实非常简单,不需要你下载任何软件,但是你得有一台电脑能上网。当然,最重要的是,你要很清楚用于做引物的模板序列,至于怎么找模板序列,不再本次讨论范围。另外,要先对PCR目的序列的长度有个大致估计,好了,马上开始吧:第一步:找到Primer3的站点。你不用记住这个站点,但是要记住“Prim
引物延伸分析(primerextensionanalysis)主要用于mRNA5′端作图。poly(A)+RNA首先与过量5′端标记的且与靶RNA互补的单链寡核苷酸引物杂交,然后用反转录酶延伸这个引物。产生的cDNA与RNA模板互补且长度与引物5′端和RNA5′端之间的距离相等。该法在mR
常用的溶剂是水或者TE缓冲液(pH7.4——8.0),两者在实际实验中都是常用的。一般认为,TE缓冲液比较稳定,能提供稳定的pH环境,适合于保存引物(以及质粒或基因组DNA)。但也有人认为,TE中的EDTA分子会影响后续PCR的效率。如果您很注重PCR效率的话就要考虑到这一点。而双蒸水很易得,操作方
实验方法原理聚合梅链式反应(polymerasechainreaction)即PCR技术,是一种在体外快速扩增特定基因或DNA序列的方法,故又称基因的体外扩增法。PCR技术已成为分子生物学研究中使用最多,最广泛的手段之一,而引
试剂、试剂盒PCRSuperMix-UDGROX染料蒸馏水反向引物正向引物仪器、耗材ABIPrism7700型号系列检测系统实验步骤一、材料1.缓冲液、溶液和试剂以50ul反应体系为例。PlatinumQuantitativePCRSuperMix-UDG(Invitrogen
内分泌(internalsecretion)是外分泌的对应词,是由C·Bermard(1859)所命名,即机体组织所产生的物质不经导管而直接分泌于血液(体液)中的现象。包括4个概念:1)内分泌;2)内分泌系统;3)“内分泌紊乱”的简称;4)“内分泌系统疾病”的简称。1)内分泌是一生理学名词;机体
试剂、试剂盒PCRSuperMix-UDGROX染料蒸馏水反向引物正向引物仪器
试剂、试剂盒PCRSuperMix-UDGROX染料蒸馏水反向引物正向引物仪器、耗材ABIPRISM7700型号系列检测系统实验步骤一、材料1.缓冲液、溶液和试剂以50ul反应体系为例。PlatinumQuantitativePCRSuperMix-UDG(Invitro
许多表达载体可能没有能够克隆标记物的合适的限制性酶切位点。在这种情况下,采用PCR技术将多肽标记物插入到已经克隆化的开放阅读框。在设计PCR正向和反向引物时,可引入较长的片段以在蛋白的氨基或羧基末端引入多肽标记物。,选择用于编码标记物特定氨基酸的密码子,使其能够用于表达标记蛋白的生物系统中。引
科学家经常使用相对湿度来形容空气中水气的多少。简单的说即是想象空气是一条毛巾。如果你倒泻了一杯水,你能用一条毛巾吸收水。但其实毛巾其实可以吸收比一杯更多的水。或许他可以吸收五至十杯的水。空气中所拥有有的水气的数量只是空气中能够拥有的水气的一部分,因此相对湿度是一百分比。当相对湿度是百分之一百时,空气
盐溶指在蛋白质水溶液中,加入少量的中性盐,如硫酸钠、氯化钠等,会增加蛋白质分子表面的电荷,增强蛋白质分子与水分子的作用,从而使蛋白质在水溶液中的溶解度增大。
当流体与多孔固体接触时,流体中某一组分或多个组分在固体表面处产生积蓄,此现象称为吸附。吸附也指物质(主要是固体物质)表面吸住周围介质(液体或气体)中的分子或离子现象。
景深(DOF),是指在摄影机镜头或其他成像器前沿能够取得清晰图像的成像所测定的被摄物体前后距离范围。光圈、镜头、及焦平面到拍摄物的距离是影响景深的重要因素。
从生物体的某些细胞、组织或器官里产生出某种物质;岩石中的裂隙逐渐被流动的矿物溶液填满。
视角,视线与显示器等的垂直方向所成的角度,观察物体时,从物体两端(上、下或左、右)引出的光线在人眼光心处所成的夹角。物体的尺寸越小,离观察者越远,则视角越小。正常眼能区分物体上的两个点的最小视角约为1分。