廖楚舒1，范莎莎1，邓中华2，曹友德2
（1.湖南省人民医院血液科，湖南长沙410005；2.湖南省人民医院检验科，湖南长沙410005）
关键词：凝血酶敏感蛋白1；血管内皮生长因子；原发性肝癌
原发性肝癌（primaryhepaticcarcinoma，PHC）是世界上常见的十大恶性肿瘤之一。近年来在肝癌治疗方面已有较大进展，但PHC早期较为隐匿，临床确诊时多已为中﹑晚期，治疗效果欠佳，早期发现PHC并及时治疗可大大提高患者的5年生存率[1-2]。因此，PHC的早发现﹑早诊断﹑早治疗显得尤为重要。目前，临床用于PHC诊断的血清标志物主要是甲胎蛋白（alpha-fetoprotein，AFP），但由于某些PHC患者癌细胞不分泌AFP，检测有时亦可阴性，所以仅凭AFP诊断肝细胞肝癌很容易造成漏诊或误诊[3]。我们旨在探讨凝血酶敏感蛋白1（thrombospondin1，TSP-1）﹑血管内皮生长因子（vascularendothelialgrowthfactor，VEGF）血清水平与PHC进展的关系，并评价2项指标对PHC早期诊断的价值。
1.1研究对象
选取2013年1月—2014年3月湖南省人民医院住院确诊的PHC患者88例，其中男53例﹑女35例，年龄（57.8±15.0）岁，按照PHC中国分期标准[4]，将88例PHC患者分为3期：Ⅰ期20例﹑Ⅱ期25例﹑Ⅲ期43例。正常对照组为肝功能及肝脏B超检查显示正常的体检者40名，其中男23名﹑女17名，年龄（45.8±14.3）岁。各组间年龄﹑性别差异无统计学意义（P＞0.05）。
1.2方法
1.2.1样本采集所有对象均于清晨空腹，自肘正中静脉抽取静脉血3～4mL，以800×g离心15min分离血清，以120μL分装于Eppendorf管中，置于-70℃保存待检。
1.2.2TSP-1﹑VEGF的检测血清TSP-1和VEGF的检测采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELISA），试剂盒均购自Cusabio公司。检测严格按照试剂盒说明书进行。
1.2.3AFP的检测取10μL血清样本，采用Cobase601电化学发光全自动免疫分析仪（瑞士罗氏公司）及配套试剂（电化学发光法）测定血清AFP水平。
1.3统计学方法
2.1PHC组与正常对照组血清TSP-1和VEGF水平的比较
PHC组血清TSP-1水平明显低于正常对照组（P＜0.05），血清VEGF水平明显高于正常对照组（P＜0.05）。见表1。
组别例数TSP-1（μg/mL）VEGF（pg/mL）PHC组8865.92±31.92173.64±158.20正常对照组40200.11±106.4073.70±38.22t值10.692.11P值＜0.05＜0.05
2.2血清TSP-1及VEGF水平在正常对照组和PHC组各期患者中的变化
PHC组Ⅰ﹑Ⅱ﹑Ⅲ期患者血清TSP-1水平均低于正常对照组（P＜0.05），PHC组Ⅲ期患者血清TSP-1水平低于PHC组Ⅰ和Ⅱ期患者（P＜0.05），但PHC组Ⅰ﹑Ⅱ期患者之间血清TSP-1水平差异无统计学意义（P＞0.05）。正常对照组﹑PHC组Ⅰ期﹑PHC组Ⅱ期间血清VEGF水平差异无统计学意义（P＞0.05），但PHC组Ⅲ期患者血清VEGF水平高于正常对照组﹑PHC组Ⅰ期患者﹑PHC组Ⅱ期患者（P＜0.05）。见表2。
注：与正常对照组比较，*P＜0.05；与PHC组Ⅰ期比较，#P＜0.05；与PHC组Ⅱ期比较，△P＜0.05
组别例数TSP-1（μg/mL）VEGF（pg/mL）正常对照组40200.11±106.4073.70±38.22PHC组Ⅰ期20101.60±25.62*92.65±62.28Ⅱ期2577.87±22.62*106.39±78.45Ⅲ期4342.37±16.50*#△247.44±201.56*#△
2.3TSP-1﹑VEGF﹑AFP对PHC的诊断效能评价
ROC曲线分析显示，血清TSP-1﹑VEGF及AFP诊断PHC的ROC曲线下面积（areaundercurve，AUC）[95%可信区间（confidenceinterval，CI）]分别为0.893（0.813～0.954）（P＜0.05），AFP0.712（0.711～0.912）（P＜0.05），VEGF0.568（0.466～0.671）（P＞0.05）。
图1TSP-1﹑VEGF和AFP诊断PHC的ROC曲线
2.4TSP-1﹑VEGF﹑AFP对早期PHC诊断效能的评估
ROC曲线分析显示，TSP-1﹑VEGF和AFP诊断早期PHC（Ⅰ期）的AUC（95%CI）分别为0.883（0.735～0.935）（P＜0.05）﹑0.821（0.629～0.906）（P＜0.05）﹑0.539（0.374～0.704）（P＞0.05）。见图2。以ROC曲线上约登指数最大值时的指标水平为截断点，TSP-1的临界值为132.11μg/mL，敏感性为95.0%，特异性为70.0%；AFP的临界值为19.15ng/mL，敏感性为85.0%，特异性为75.0%。见表3。
图2TSP-1﹑VEGF和AFP诊断早期PHC的ROC曲线
表3TSP-1﹑AFP诊断早期PHC的敏感性﹑特异性及约登指数
指标敏感性（%）特异性（%）约登指数TSP-195.070.00.650AFP85.075.00.600
PHC是恶性程度高﹑危害大的恶性肿瘤，PHC患者就诊时多数已属中﹑晚期，治疗效果不理想。因此，PHC的早期诊断﹑正确诊断对提高患者的5年生存率以及改善生存质量至关重要[5]。
TSP-1是一种重要的细胞外基质糖蛋白，能够调控内皮细胞的黏附﹑运动和增殖，是一种有效的内源性血管生成抑制因子，在肿瘤的生长﹑迁移﹑降解细胞外基质和血管生成方面起重要作用[6-7]，可抑制肿瘤血管生成。而肿瘤新生血管生成对实体瘤的生物学行为和转移潜能起重要作用，抑制肿瘤的血管生成可阻止肿瘤的生长﹑转移[8]。现已发现多种肿瘤患者TSP-1水平降低，肿瘤的恶性程度及转移率高，患者预后较差[7]，但PHC患者血清TSP-1水平国内还少有报道，特别是其对早期PHC诊断价值的研究国内外鲜有报道。
VEGF是一种相对分子质量为34000～42000的糖蛋白，由某些肿瘤细胞分泌，可与血管内皮细胞上的受体结合，诱导血管生成并维持肿瘤的继续生长[9]。
新近国内研究表明，在包括PHC在内的多种肿瘤组织中TSP-1水平越低﹑VEGF水平越高，肿瘤的微血管密度（microvesseldensity，MVD）越高，肿瘤侵袭性越强[10-12]，这充分证明了TSP-1作为血管生成抑制因子﹑VEGF作为血管生成促进因子在肿瘤的形成和发展中发挥着重要作用。文卫等[13]在TSP-1﹑VEGF与肝癌患者术后复发﹑转移的关系方面也做了深入研究，其研究结果显示TSP-1是重要的血管生成抑制因子，在一定程度上可以限制肝癌的复发和转移；VEGF是重要的血管生成促进因子，在肝癌的复发和转移中起重要的促进作用。但对PHC患者血清学这2项指标的研究较少，尤其是对于早期PHC的诊断价值少有报道。
参考文献：
[1]首志雄.原发性肝癌的多学科治疗进展[J].临床误诊误治，2013，26（5）：103-106.
[2]WANGZ，ZHANGG，WUJ，etal.Adjuvanttherapyforhepatocellularcarcinoma：currentsituationandprospect[J].DrugDiscovTher，2013，7（4）：137-143.
[3]DANIELEB，BENCIVENGAA，MEGNAAS，etal.Alpha-fetoproteinandultrasonographyscreeningforhepatocellularcarcinoma[J].Gastroenterology，2004，127（5Suppl1）：S108-S112.
[4]中华医学会.临床诊疗指南（肿瘤分册）[M].北京：人民卫生出版社，2005：325-326.
[5]周建光，杨梅，曹海涛，等.肿瘤标志物对原发性肝癌的诊断意义[J].医学综述，2013，19（12）：3891-3893.
[6]SHIRAHAH，YAMAMOTOK，NAMBAM.Humanhepatocytecarcinogenesis[J].IntJOncol，2013，42（4）：1133-1138.
[7]赵培雷，郭平.凝血酶敏感蛋白-1在肿瘤中的研究进展[J].国际肿瘤学杂志，2011，38（11）：823-826.
[8]RENNEMEIERC，HAMMERSCHMIDTS，NIEMANNS，etal.Thrombospondin-lpromotescellularadherenceofgram-positivepathogensviarecognitionofpeptidoglycan[J].FASEBJ，2007，21（12）：3118-3132.
[9]胡海涛，沈世强.国内肝细胞癌患者血清中血管内皮生长因子表达的Meta分析[J].肝胆外科杂志，2011，19（5）：345-350.
[10]YAMAUCHIM，IMAJOH-OHMIS，SHIBUYAM.Novelantiangiogenicpathwayofthrombospondin-1mediatedbysuppressionofthecellcycle[J].CancerSci，2007，98（9）：1491-1497.
[11]KAZEROUNIANS，DUQUETTEM，REYESMA，etal.Primingofthevascularendothelialgrowthfactorsignalingpathwaybythromhospondin-1，CD36，andspleentyrosinekinase[J].Blood，2011，117（17）：4658-4666.
[12]ALLEGRINIC，COULETTEFA，DARNOWSKIJW，etal.Thrombospondin-1plusirinotecan：anovelantiangiogenic-chemotherapeuticcombinationthatinhihitsthegrowthofadvancedhumancolontumorxenograftsinmice[J].CancerChemotherPharmacol，2004，53（3）：261-266.
[13]文卫，杨连粤，黄耿文，等.TSP-1和VEGF在肝细胞癌新生血管生成中的作用[J].中华肝胆外科杂志，2005，11（1）：17-19.
RelationshipsofserumTSP-1andVEGFlevelswithprimaryhepaticcarcinoma
LIAOChushu1，FANShasha1，DENGZhonghua2，CAOYoude2.（1.DepartmentofHematology，HunanProvincialPeople'sHospital，Changsha410005，Hunan，China；2.DepartmentofClinicalLaboratory，HunanProvincialPeople'sHospital，Changsha410005，Hunan，China）
Keywords：Thrombospondin1；Vascularendothelialgrowthfactor；Primaryhepaticcarcinoma
中图分类号：：R446.62
文献标志码：：ADOI：10.3969/j.issn.1673-8640.2017.02.008