汞、镉、铅、砷、铜、滴滴涕、多氯联苯、石油烃等含量
粪大肠菌群、细菌总数
以环境污染为主要压力的生态系统
所有生态系统
河口生态系统
生态效应指标
初级生产力
叶绿素a
C14
生物多样性
种类多样性
生物多样性指数
群落结构
种类组成(优势种/常见种/敏感种等)
生物量
密度
浮游生物、底栖生物、潮间带生物
底栖生物、潮间带生物、浮游生物
浮游动物、底栖生物、潮间带生物
珊瑚、红树林等种群的密度、生物量、年龄结构等
测试方法
汞(Hg)
原子荧光分光光度法
镉(Cd)
无火焰原子吸收分光光度法
铅(Pb)
砷(As)
铜(Cu)
石油烃
紫外分光光度法
滴滴涕(DDT)
气相色谱法
多氯联苯(PCBs)
名称
网长
m
网口内径cm
网口面积
m2
筛绢规格
（孔宽近似值mm）
适用范围及采集对象
浅水Ⅰ型浮游生物网
145
50
0.2
CQ14（0.505）
JP9.4（0.507）
适用于20m以浅垂直或分段采集大型浮游动物和鱼卵、仔稚鱼
浅水Ⅱ型浮游生物网
140
31.6
0.08
CB36（0.160）
JP36（0.169）
适用于20m以浅垂直或分段采集中、小型浮游动物
浅水Ⅲ型浮游生物网
37
0.1
JF62(0.077)
JP80(0.077)
适用于20m以浅垂直或分段采集浮游植物
评价标准
石油烃≤
20.0×10-6湿重
汞≤
0.3×10-6湿重
镉（贝类）≤
2.0×10-6湿重
镉（鱼类）≤
1.0×10-6湿重
铜≤
10×10-6湿重
铅≤
砷≤
六六六≤
0.02×10-6湿重
滴滴涕≤
0.1×10-6湿重
多氯联苯≤
粪大肠菌群＜
300个/100g鲜肉
异养细菌＜
5.0×105cfu/g鲜肉
生物质量
生物体污染物含量
汞、镉、砷、铅、铜、六六六、滴滴涕、多氯联苯、多环芳烃、石油烃
生物体细菌学指标
粪大肠菌群、异养细菌、弧菌等
水体污染物含量及富营养化指标
溶解氧、总磷、总氮、化学耗氧量
沉积物污染物含量
水产养殖、捕捞、旅游、沿岸工程建设、河口排污等现状、动态、趋势
物种多样性
浮游植物
种类组成、分布密度、生物量
浮游动物
种类组成、分布密度、叶绿素a
大型底栖动物
种类组成、栖息密度、生物量
文昌鱼种群结构
分布区域、栖息密度、生物量、年龄结构（个体组成）
A.2生态系统压力指标确定的依据
昌黎海洋生态站地处河北省昌黎县昌黎黄金海岸国家级自然保护区海域。本底监测结果表明：海域的主要生态压力是环境污染、海面扇贝人工养殖、农业、捕捞、旅游及海岸工程建设。
选择双壳类（文蛤）、腹足类（脉红螺、扁玉螺）及鱼类（蓝点马鲛）污染物含量作为监测海洋污染压力现状指标。双壳类通过滤食浮游植物吸收污染物，腹足类通过摄食沉降碎屑或藻类植物收污染物，鱼类通过摄食其它动物（浮游动物、甲壳动物、鱼类等）吸收污染物，因而三个类群生物污染物含量指标可以全面反映环境污染的现状及趋势。由于海区内文蛤曾出现大量死亡现象，加上黄金海岸旅游人数的不断增加，将贝类体内细菌学指标作为监测人为活动及海洋生物病害发生的指标。
文昌鱼是保护区海域保护的对象，也是国家二级保护动物，对底质的要求非常严格。由于海水养殖和渔业捕捞作业会造成底质粒度的改变，因而选择底质粒度作为监测这些压力的指标。
本底监测表明，监测海域的总N、总P在多数季节里含量超标准，主要是由于农业陆源污染，海面养殖及河口有机污染物的排放所致，因而选择总氮、总磷作为海域有机污染压力的指标。另外监测海域曾经发生过赤潮，为监测与赤潮发生有直接关系的海水富营养化水平，化学耗氧量也被列入监测指标。
为区分各种环境压力的变动趋势，对每年农业化肥、农药使用量，河口排污，渔船数量，养殖面积，旅游人数，沿岸人工育苗室的建设等指标进行了监测。
A.3公众关心物种的确定
附录Ｂ
（规范性附录）
生物体内细菌学指标检测技术
B.1仪器设备
——恒温培养箱：25℃-44℃；
——干热灭菌箱；
——高压蒸气灭菌器；
——接种环；
——培养皿：直径9cm；
——试管：12x150mm；
——吸量管：1，10ml；
——发酵管：5x30mm；
——玻璃刮棒：接种用；
——纱布和棉花：塞试管用；
——锥形烧瓶；
——牛皮纸；
——电炉：2000W；
——超净工作台；
——一般实验常用仪器设备；
——无菌研钵
B.2采样方法
现场生物样品采集系用一次性消毒手套采取活生物于无菌朔料袋中，做好标记、及时装入便携式冷藏箱中。
B.3测试分析方法
B.3.1测试分析方法-发酵法
B.3.1.1方法原理
大肠菌群系一群在37℃或44℃生长时能使乳糖发酵、在24h内产酸产气的需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。大肠菌群数系指单位生物样中所含有的“大肠菌群”的数目。一般在37℃培养生长的称为“总大肠菌群”，在44℃培养生长的称为“粪大肠菌群”。海洋生物检验采用44℃培养法，以检出粪大肠菌群。
发酵法系通过初发酵及复发酵二个步骤，以证实生物体中是否存在粪大肠菌群并测定其数目。
B.3.1.2试剂及培养基配制
a）试剂配制
1）溴甲酚紫乙醇溶液
称取1.6g的溴甲酚紫[C6H4SO2OC（C6H2CH3OHBr）2]溶于2-3mL乙醇（C2H5OH）中，然后用蒸馏水定容到100mL。
2）碳酸钠溶液
称取10.6g碳酸钠（NaCO3）溶于蒸馏水，并定容到100mL。
b）乳糖蛋白胨培养基的配制
1）培养液成份
蛋白胨
10.0g
牛肉膏
3.0g
乳糖
5.0g
氯化钠
溴甲酚紫乙醇溶液(b)-1))
1mL
蒸馏水
1000mL
2）制法将规定量的蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化钠（NaCl）加热溶解于1000mL蒸馏水中，用碳酸钠（a）-1)）溶液调节pH为7.2-7.4。加入1mL溴甲酚紫乙醇溶液（a）-2)），混匀，分装于置有倒管的试管内（10mL左右）。置高压蒸气灭菌器中，于115℃（68.95kPa）灭菌20min。根据需要，可按上述配制方法将蒸馏水由1000mL减为333mL，制成浓缩三倍的乳糖蛋白胨培养液备用。c）EC培养基配制1）成份胰蛋白胨或示胨
20.0g
胆盐混合物或3号胆盐
1.5g
磷酸氢二钾（K2HPO4·3H2O）
4.0g
磷酸二氢钾（KH2PO4）
氯化钠（NaCl）
2）制法
将上述成份加热溶解，分装于内装倒管的试管中，同上灭菌后pH值应为6.9。此培养基用前不宜置入冰箱，以防检测时出现假阳性。
B.3.1.3检验步骤
a)初发酵试验
1)生物样品在无菌操作条件下取全组织样放入无菌玻璃研钵中研磨，研磨后用特殊加工的大口移液管无菌移取1.0克样品至9.0毫升无菌海水的试管中，制备成10-1稀释样。然后，用一系列装有9.0毫升无菌海水的试管连续稀释，制备成10-2、10-3、10-4稀释样。
2)吸取上述10-1、10-2、10-3稀释样，每个稀释度各取1mL稀释样5份，分别加入5支盛有10mL已灭菌的普通浓度乳糖蛋白胨培养液的试管中（内有倒管）。
3)将上述15支试管充分混匀后，置于44℃恒温箱中培养24h。
b)复发酵试验
经培养24h后，将产酸（培养液变成黄色）产气（倒管上端积有气泡）及只产酸的发酵管，用一无菌环（3mm直径）或木压舌板转接入EC培养液中，摇匀后置44±0.5℃恒温箱中培养24±2h。在此期间内所得的产气阳性管即证实有粪大肠菌群存在。
依据阳性管数查对照表B.1，即可得每g生物样中粪大肠菌群的最近似值（MPN）。
若海生物样污染较严重，接种后15管全部产酸产气时，可将接种量减少为十分之一，即1mL的5管，0.1mL（1-9稀释的1mL）5管，0.01mL（1+99稀释的1mL）的5管。此时，由表B.1查得的每1/10g生物样中的大肠菌群数。
B.1粪大肠菌群检数对照表
出现阳性份数
每g生物样中粪大菌群数的最近似值
95%可信限度
95%可信限值
5个
10-1
管
10-2
10-3
下限
上限
0
1
2
3
4
＜2
6
5
7
9
12
8
11
14
17
13
21
26
22
＜0.5
15
28
19
25
34
46
31
63
78
67
27
33
23
43
49
70
94
79
110
180
130
170
220
280
350
240
540
920
1600
≧2400
16
44
35
57
90
120
68
300
640
80
93
89
150
190
250
340
500
490
700
850
1000
750
1400
3200
5800
注:接种5份10mL水样、5份1mL水样、5份0.1mL水样时，各种不同阳性及阴性情况下100mL水样中大肠菌群数的最近似值和95%可信限值.
5g
酵母膏
1g
磷酸高铁
0.1g
琼脂
20g
陈海水
站号
水深
（m）
水温
（℃）
潮汐
盐度
pH
样品号
水深（m）
稀释度
菌落数
平均值
细菌数（个/100g鲜肉）
海区
调查船
网型
年月日时分至年月日时分
瓶号
绳长（m）
倾角（o）
备注
开始
终了
海况
（记事）
数量
小计
个/L
硅藻种数（种）
数量（个）
甲藻种数（种）
其它（种）
总量（个）
多样性指数（Hˊ）
分析者计算者校对者C.3浮游动物生物量测定表C.3浮游动物生物量测定表标本编号
筛绢+样品湿重（mg）
筛绢湿重
（mg）
样品湿重
滤水量
（m3）
（mg/m3）
拖网标本总数：
种类鉴定记录
次序
种名
总个数（个）
密度(ind/m2)
总重量（g）
生物量(g/m2)
附注
生物多样性指数（H/）
记事：
种数（种）
总个体数（个）
分析者计算者校对者
D.3浮游植物数量统计
表D.3浮游植物数量统计表
采样时间
日期
总种数（种）
总细胞数（个）
多样性指数
（Hˊ）
细胞数量
采
样
时
间
生物量（mg/m3）
个体数（个）
个体数
注：个体数单位个/m3分析者计算者校对者本规程的附录A为资料性附录，附录B、附录C、附录D为规范性附录。本规程由国家海洋局海洋环境保护司第一次提出。本规程起草单位：国家海洋环境监测中心。本规程主要起草人：马明辉、王健国、冯志权、林凤翱、孙育红、王菊英、韩庚辰。