UniversalProbeLibrary在线引物设计3步带你搞定qPCR引物设计（物种齐全）

UniversalProbeLibrary在线引物设计--3步带你搞定qPCR引物设计（物种齐全）

mRNA引物设计最全攻略，教你快速学会各类高端引物设计方法、在线引物设计及各引物设计软件使用安装破解及使用教程等。

已讲解内容：

用NCBI查找已公布的引物序列，3秒钟就能带你完美找到~

最实用的NCBI在线引物设计窍门，包你学会！

本期内容：

1、ID查询

这里我们以“humanp53”为例，进行引物设计。点击进入PubMed

进入PubMed网页后，首先我们可以在搜索栏中选择核苷酸，再输入基因+物种+mRNA，最后点击搜索开始检索。

然后会出现上图所示的界面，这时候我们可以单击选择mRNA选项。如下图所示，此条目为我们所寻找的p53humanmRNA。

2、设计RT-qPCR三步走

进入网址：

进入首页后，我们单击选择“AssayDesignCenter”选项。

设计RT-qPCR分为以下3步：

第一步：点击下拉框选择物种，目前这个网站支持human以及多种模式生物。

第二步：输入基因名、基因号或基因序列；如：输入p53的序列ID：AB082923.1。

然后点击选择是否需要跨越内含子设计。

第三步：点击“设计引物”键即可。

3、选择转录本

这里我们以搜索“GAPDH”为例。

如下图所示，如果输入的是基因名，则会出现了若干个转录本，选择你需要的转录本，然后点击勾选。然后点击页面最右下角的“设计引物”键。

4、跨内含子区域计算

有的时候软件计算发现没有好的跨内含子区域的引物，这时它会询问你是否继续，点击“here”继续即可。