SingleCellRNASequencing（PanoCell）
单细胞测序技术（SingleCellSequencing）是在单个细胞水平上，揭示全基因组范围内的所有基因表达情况，包括鉴定组织细胞类型，反映不同样本间的细胞异质性和组织微环境。
【烈冰智造】于2021年9月发布了第一款用于单细胞测序的实验耗材——PanoCell?双通道微孔芯片；2022年9月推出了灵活度更高、兼容性更好的PanoCell?微孔芯片V2.0版。升级后的V2.0芯片将提供自研蜂巢板+BD平台原装进口单细胞分选试剂+华大T7超高通量测序仪的服务新方案！
1.自主研发PanoCell微孔芯片，搭配BDRhapsody单细胞平台+BD磁珠+BD全套原装试剂及protocol；
4.完善的质控流程和数据分析经验：烈冰自研的CytoNavigator百万级通量数据分析系统确保数据的可靠性和质量，同时能够提供个性化、定制化的数据分析服务，帮助研究人员从海量的单细胞数据中获取有意义的信息。
样本类型：
组织、血液、培养的细胞系、制备好的单细胞悬液
注：若客户样本为组织，且无能力进行组织解离来获取单细胞悬液，烈冰将尽可能提供技术及实验上的帮助，但因不同类型样本的特异性，无法保证实验方法适用于所有类型组织。
质量要求：
1.细胞活性大于70%
2.浓度为500-2000细胞/μl
3.体积不小于200μl
4.细胞培养基及缓冲液不能含Ca2+和Mg2+
5.细胞体积小于40μm
1.单细胞悬液制备：根据样本特性选择合适的单细胞悬液制备方法，注意红细胞裂解；如若客户样本为已经制备好单细胞悬液，该步骤可以省略；
2.细胞活性检测：细胞活性需大于70%；
3.单细胞捕获：通过分选平台（BD）对每个细胞进行捕获；
4.细胞/转录本标签添加：对结合磁珠标签的RNA进行逆转录引入CB和UMI；
5.文库构建：对cDNA进行随机引物PCR扩增；
6.上机测序：烈冰推荐IlluminaHiseq或NovaSeq测序平台，数据量100G/样本。
单细胞悬液的制备流程
注：活细胞检测明场图（左），绿色荧光（中），红色荧光（右）
BDRhapsody单细胞分析系统的诞生基于BD在细胞生物学领域40年的专业技术，采用CytoSeq技术进行单细胞捕获。应用烈冰PanoCell微孔芯片（包含20W+的微孔（该数量级远大于Input细胞数量）），搭配BD平台磁珠+全套试剂+protocol，保证单孔中的单细胞捕获。同时避免了传统微流控系统中存在的概率碰撞影响捕获效率的问题，采用微孔捕获相对会有更好的捕获效率，保证Input细胞的全面使用。
DNBSEQ-T7超高通量测序仪
注：横坐标为细胞数量，纵坐标为每个细胞对应的平均counts数，根据曲线的斜率判断实际检测的细胞数量
注：左图为细胞中总共检测到的基因数量，右图为去除重复UMI后统计的基因数量
注：横坐标表示每个细胞中UMI的数量，纵坐标表示线粒体基因的占比情况
Chen,etal.NatureCellBiology,2021Jan;23(1):87-98.
注：左图为前列腺肿瘤组织细胞亚群鉴定t-SNE图展示；右图细胞亚群分群情况
Zhangetal.,Glia.2021Mar;69(3):765-778.
Zhang,etal.Glia.2021Mar;69(3):765-778.
ZhangC,etal.JImmunotherCancer2021;9:e002312.
Chen,etal.NatureCommunication2020;11:5077
注：该图为不同cluster之间转录因子调控强度heatmap图
注：该图为不同cluster之间信号同理调控强度热图
注：细胞间状态转换的pesudotime轨迹图（左）、轨迹中细胞占比饼图和Heatmap图（右）
注：左图：横坐标表示细胞类型，纵坐标表示细胞间通讯配受体关系，圆圈大小表示显著性差异水平，圆圈颜色越红表示细胞间通讯关系越强
[1]CD_99G1neutrophilsmodulateosteogenicdifferentiationofmesenchymalstemcellsinthepathologicalprocessofankylosingspondylitis.AnnRheumDis.2023Oct；IF=27.4
[2]ImmunosuppressiveCD10+ALPL+neutrophilspromoteresistancetoanti-PD-1therapyinHCCbymediatingirreversibleexhaustionofTcells.JournalofHepatology.2023Aug;IF=25.7
[3]EndothelialresponsetotypeIinterferoncontributestovasculopathyandfibrosisandpredictsdiseaseprogressionofsystemicsclerosis.Arthritis&Rheumatology.2023Jul;IF=13.3
[4]Schwanncellsregulatetumorcellsandcancer-associatedfibroblastsinthepancreaticductaladenocarcinomamicroenvironment.NatureCommunicationsl.2023Jul;IF=16.6
[5]WT1+glomerularparietalepithelialprogenitorspromoterenalproximaltubuleregenerationaftersevereacutekidneyinjury.2023Feb;IF=12.4
[6]Single-cellRNA-seqanalysisrevealsBHLHE40-drivenpro-tumourneutrophilswithhyperactivatedglycolysisinpancreatictumourmicroenvironment.GUT.2022Jun;IF=24.5