教你学会CRISPRCas9基因敲除技术

日前，发表在Development上题为“OptimizedinducibleshRNAandCRISPR/Cas9platformsforinvitrostudiesofhumandevelopmentusinghPSCs”的一项研究中，WellcomeTrus

2015年12月1－3日，在华盛顿特区将召开一次大型国际会议，人类基因组编辑的伦理学将会再次成为召开的一个的主题。这次峰会将由美国国家科学院、美国国家医学科学院、中国科学院和英国皇家学会联合组织，在该会议举办前，《自然》收集整理了关于人类基因编辑的7个事实。一、目前只发表一项人类生殖细胞的基

之前的方法在效率、质量（假阳性、假阴性）上各有欠缺：比如CRISPRi的方法只能实现基因表达抑制而不是完全敲除，CRISPRa的方法只能上调基因表达，无法对基因不可或缺的作用实施筛选评估。大片段删除的策略由于步骤的繁琐，也限制了其在更大规模上得到应用。作为强大的基因编辑工具，CRISPR/C

来自北京大学的研究人员开发出了一个新型的CRISPR/Cas9sgRNA文库，提出了一种基于sgRNA文库功能筛查和高通量测序分析的基因鉴别新方法。论文的通讯作者是北京大学生命科学学院的魏文胜(WenshengWei)研究员。其主要研究领域包括病原微生物感染分子机理，发展宿主

Dana-Farber/波士顿儿童医院癌症及血液疾病中心开发了一种新型筛选方法：使用CRISPR-Cas9基因编辑技术测试小鼠中数千种肿瘤基因的功能。新型筛选方法揭示了新的药物靶标，可能潜在地增强PD-1检查点抑制剂的有效性，是一种有前景的新型癌症免疫治疗手段。研究结果在线发表在Natur

深圳市医疗卫生科研水平又有了新的突破。25日，深圳市儿童医院新生儿科主任付雪梅的“863”计划课题“CRISPR/Cas9核酸酶靶向修饰治疗艾滋病”项目正式启动，该项目获得了国家1289万元的课题经费，也是深圳卫生系统首个以课题负责人立项的“863”计划课题。据悉，付雪梅的课题将尝试用基因编辑的

最近，CRISPR/Cas9系统也应用于靶基因的抑制（CRISPRi）或激活（CRISPRa)的遗传修饰。这类修饰系统可用于研制相应致癌基因，和/或抑制TSGs基因的诱导和可逆激活小鼠模型。比如借助CRISPRa为基础的系统，通过激活致癌基因的转录，达到研究其致癌潜力的目的。虽然CRISPR/Cas

大多数人类遗传病是由于点突变---DNA序列上的单个碱基错误---导致的。然而，当前的基因组编辑方法不能够高效地校正细胞中的这些突变，而且经常导致随机的核苷酸插入或删除（insertionsordeletion,indel）。如今，在一项新的研究中，来自美国哈佛大学的研究人员对CRIS

为了更好地控制“魔剪”CRISPR/Cas9，科学家需要一种具有“抑制开关”作用的分子机制来抑制其酶活性，在最新的《ScienceAdvances》杂志中，加州大学伯克利分校的CRISPR先驱JenniferA.Doudna教授及其研究小组展示了一种抗CRISPR蛋白的抑制剂AcrIIA

Cas9是CRISPR的手术刀，但有时它会错误编辑基因组正常部分，扰乱健康的功能，而不是修复引起疾病的基因。长期以来，科学家担心这可能会无意中导致健康的细胞变成癌症，而这些担忧在今年6月开始加深，当时有两项研究表明，即使是成功编辑的细胞也容易发生致癌突变。此外，7月在《NatureBiotec

斑马鱼是开展生命科学、健康科学、环境科学等研究的重要模式动物。在斑马鱼研究历史上，欧美学者发起过几次大规模的随机诱变突变体库，开展基于“从表型到基因型”的正向遗传学筛选，奠定了斑马鱼作为国际公认模式动物的重要基础。随着斑马鱼全基因组测序的完成和CRISPR/Cas9等基因组编辑技术的成熟，规

多元PCR(多重PCR，MultiplexPCR，MPCR)是指在一个PCR反应中使用一个模板和几对引物同时扩增多个目的片段的PCR反应。这项技术非常有用，他不仅可以提高PCR的产率还能提高DNA样品的利用率。另一种形式的MPCR是组合PCR,组合PCR是在同一

设计策略MPCR要求所有的引物对在同一条件下扩增其各自的特异序列。大多数多元PCR反应局限于扩增5~10个目的片段，原因之一是反应中，每另加入一对引物会导致一定程度的灵活性的丢失。引物数量的增加也使引物二聚体和非特异扩增出现的概率增加。因此，进行多元PCR要求周密计划

基因修饰动物是研究在发育和疾病中基因功能的重要工具。CRISPR/Cas9系统有效的应用于构建基因敲除和敲入小鼠。而杨辉团队正好专注于该领域。杨辉，30岁时，就成为中科院上海生科院神经所研究员；2015年，入选国家“青年千人计划”；2019年，杨辉博士获得国家杰出青年基金资助。由杨辉创办

摘要：CRISPR/Cas9基因组编辑技术和新一代测序技术（也称高通量测序技术），是当今对生命科学研究有重大影响的两项技术。二者并非毫不相干。有效地将二者联用，有时可以大大加速科研进程。两者之间有什么样的联系呢？在哪些研究领域或方向上可以联用呢？上海伯豪生物根据在这两个领域的技术服务经验

基因编辑再次成为舆论风暴的中心，26日，南方科技大学生物系副教授贺建奎对媒体宣称：一对基因经过修改的双胞胎已于11月诞生，基因编辑使她们出生后即能天然抵抗艾滋病。多位生命科学领域专家对科技日报记者表示，对此感到“震惊”甚至“愤怒”。26日下午，中国科学技术大学毕国强、四川大学华西医

6月25日，中国农业科学院作物科学研究所植物转基因技术研究中心、大豆育种技术创新与新品种选育创新团队，利用CRISPR/Cas9基因组编辑技术定点敲除大豆开花调控关键基因GmFT2a和GmFT5a，创制出更适合低纬度地区种植的突变体材料，同时系统解析了GmFT2a和GmFT5a基因在大豆花期调控

2018年一对双胞胎婴儿的CCR5基因敲除的事件在社会上引起了轩然大波，抛开这次事件而言，作为一项生物研究技术，基因敲除在药物研发领域应用也很广泛，今天我们来看一下它在药物作用靶点筛选上的作用吧！通过药物作用的靶点来设计开发创新药物是目前创新药制剂开发的一条重要线索，每年都会有作用于新靶

据《自然》杂志20日报道，瑞士苏黎世联邦理工学院领导的研究团队开发出一种方法，可极大简化和加快对基因功能的研究：使用CRISPR-Cas技术，可同时在单个动物的不同细胞内敲除不同的基因，每个细胞被改变的基因不超过一个，从而能平行观察不同基因变化导致的细胞走向。追踪疾病遗传原因的一种行之有效的

Leptin（LEP）是由脂肪细胞分泌的蛋白质类激素，主要由白色脂肪组织产生。其前体由167个氨基酸残基组成，N末端有21个氨基酸残基信号肽，该前体的信号肽在血液中被切掉而成为146氨基酸，分子量为16KD，形成Leptin。Leptin具有广泛的生物学效应，其中较重要的是作用于下丘脑的代谢