中国团队设计新冠疫苗新平台，发布mRNA首个动物实验数据

同时，作为包膜蛋白，刺突蛋白会自动组装到病毒模拟颗粒的膜中。

为了检查是否已将刺突蛋白mRNA按照设计包装到慢病毒颗粒中，研究者进行了RT-qPCR，发现每个病毒模拟颗粒平均有3或4个拷贝的刺突蛋白mRNA。为了验证刺突蛋白是否已经组装成病毒模拟颗粒及其糖基化状态，研究者以整合缺陷型慢病毒（IDLV）为对照对病毒模拟颗粒的裂解物进行了蛋白质印迹分析。分析发现，其成功修饰了带有或不带有病毒模拟颗粒突变的刺突蛋白，同时可以装载更多的突变此刺突蛋白。由于糖基化影响疫苗的免疫原性和免疫优势，实验检查了病毒模拟颗粒表面刺突的糖基化状态。值得注意的是，PNGaseF处理后，S2带向下移动，表明病毒模拟颗粒上的刺突蛋白被N-连接的糖基化修饰，这与质谱法揭示的SARS-CoV-2的近期发现一致。接下来，研究者将病毒模拟颗粒转导至293T细胞并评估了刺突蛋白的表达。在感染后36小时收获了细胞，进行Western印迹分析。在这里，研究者仍然观察到病毒模拟颗粒在293T细胞中的刺突蛋白表达，表明VSV-G被共组装成病毒模拟颗粒，从而扩大了它们的向性。研究者发现了两个主要的刺突带，可能是糖基化的全长单刺突及其二聚体/三聚体形式。

此外，研究者使用共聚焦分析法对转染或转导的293T细胞进行了确认，其表达了刺突。为了检查病毒模拟颗粒的先天免疫特性，使用THP-1衍生的巨噬细胞作为核酸传感模型，发现I型干扰素（IFN）和IFN刺激的基因ISG-15和视黄酸诱导的基因没有明显增加I（RIG-I）。由于带刺突的病毒模拟颗粒比野生型对应物更有效地掺入了刺突的mRNA和蛋白，因此研究者选择它作为体内评估的候选疫苗（指定为ShaCoVacc）。

通过解剖接种疫苗的小鼠，可进一步了解刺突特异性抗体的线性表位特征，研究者使用了一种新开发的肽微阵列，其中包含覆盖刺突整个长度的短肽。研究者发现，与疫苗接种组的某些刺突肽相对应的信号强度各不相同，安慰剂治疗的小鼠则未观察到信号。研究团队还量化了分别针对S1域和受体结合域（RBD）的抗体的信号强度。接种小鼠的血清在两个结构域均引发了明显较高的信号，这与此前刺突特异性抗体的ELISA分析和中和测定相吻合。为了获得表位的全景图，他们绘制了所有疫苗接种小鼠的热图，发现每只疫苗接种小鼠的抗原决定簇特征是不同的。但是，该研究还发现了66.7％的接种小鼠有三个常见的表位（S2-22，S2-76和S2-83）。从康复者血清中提取的针对该表位的抗体已显示出强大的中和活性。值得注意的是，S2-76和S2-83表位是保守的表位，并由SARS-CoV和SARS-CoV-2共享。

总的来说，该研究通过模拟冠状病毒表面蛋白和内部核酸，从而结合了灭活疫苗和mRNA疫苗的功能，提供了一个新的疫苗平台。由于SARS-CoV-2的资源有限，研究者目前无法用真实病毒再次感染接种过的动物。未来，研究者将进一步揭示了接种小鼠的表位概况和易受特定中和抗体影响的表位，这可能有助于药物和抗体的开发。