手把手教你设计引物(图文并茂)细胞显子序列免疫cdna

不知不觉几年下来自己也快毕业了,感谢丁香园这些年来的帮助。没有什么可回报的东西,就发个帖教教新人如何设计引物吧,尽量做到手把手的教,图文并茂。

引物设计的帖子不少,以前很多战友会推荐Oligo、PrimerPremier、DNAman等等软件。这些软件设计完最后还是要去BLAST比对下,所以我教大家一种易懂实用的在线设计方法,觉得好的话请投个票。

就以人的PTEN基因为例,首先你要找到他的基因序列,如果你要用的是cDNA,就找它的mRNA序列。如果你要做的是DNA,就找DNA的序列。

1.输入目的基因,进入

2.在左侧栏选择TRANSCRIPT,选择后进入

3.选择PTEN-001中的TRANSCRIPT进入,点击左侧cDNA

4.然后点击CONFIGURETHISPAGE进入设置你要显示的内容

5.除了第一栏SHOWEXONS选择YES外,其他的都选择NO,然后取个名字保存SAVECONFIGURATIONAS

6.然后在左侧栏点击DOWNLOADVIEWASRTF可下载你要的cDNA序列,这个文件可以用WORD打开,不同的颜色代表一个外显子间断

下载后打开的WORD

7.然后根据可以根据你感兴趣的序列设计引物了,比如我在分别在第6和第7外显子分别设计上下游引物。选取并复制第6和第7外显子序列

9.最后选择一个比较特异性的引物,条带大小要尽量单一,其他的基因序列尽量不要比对到

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THE END
1.利用SNP和小InDel,人工添加5'碱基制造Indel引物,不用CAPS设计统一的primerF,可以同时扩增AB,primerAR仅扩增A,primerBR仅扩增B,由SNP保证差异性,同时在AR或BR的5'端添加一定的碱基,人工造成indel差异。3个引物合成后等量混合以扩增。 目前已试验成功,故推广。 需要注意的点: 1.人工添加的碱基尽可能短,7-15bp左右,避免引物二聚体的同时尽可能以AT为元素,避免后续引物结https://www.bilibili.com/read/cv40066717
2.杂交枫香基因编辑载体其构建方法及其应用2a、根据实验例3构建的载体pylcrispr/cas9-pds序列设计引物,上、下游引物:sp-t1(seq id no,20,gcggtgtcatctatgttactag)和sp-r(seq id no.21:cccgacatagatgcaataacttc)。 [0190] 2b、用记号笔在步骤1)中的含卡那霉素的lb固体培养基上挑选单菌落,做好标记;在超净工作台中,使用灭菌枪头挑出1/2单菌落,加https://www.xjishu.com/zhuanli/27/202210715444.html
3.iMeta之江实验室/农科院基因组所联合开发CRISPR/Cas12a检测体系crRNA用于端到端Cas12a诊断设计的用户友好型Web工具 为提高开发基于Cas12a的诊断方法的效率,本研究创建了EasyDesign在线平台:https://crispr.zhejianlab.com/。该平台提供了全面的基于Cas12a的诊断设计方案,集成了RPA引物设计,促进了RPA-CRISPR联合检测的设计(图4A)。Web平台用户界面友好,可指导用户完成工作流程的每个步骤,https://blog.csdn.net/woodcorpse/article/details/140077598
4.CRISPRCas9基因编辑2gRNA设计(下)CRISPR-Cas9基因编辑之背景介绍及gRNA设计(上) 前言: 在上一次文章中,我们已经得到了在线工具设计的sgRNA序列,经由简单评估后选择出合适的sgRNA 1. 使用Snapgene anneal oligo 以上一次文章查到的PTEN knockout cell line 为案例,根据给出的PTEN sgRNA,完善oligo序列,并再Snapgene软件中匹配出来 https://www.jianshu.com/p/0a3ffd23bdff
5.求助crisprcas9引物设计软件动植物小木虫我知道有两个在线设计引物的软件,不知道是不是你要的 http://crispr.mit.edu/ http://www.e-crisp.org/E-CRISP/designcrispr.html 就算不是,我觉得你说的那个肯定也是在线设计引物的,不防把关键词在Google里 谢谢你的回复,我也知道有在线设计的软件,但选起来相对复杂,我看文献里他那个挺简单方便的,https://muchong.com/html/201511/9576640.html
6.预设计DNACRISPR产品Cas9蛋白功能基因组详细了解我们的寡核苷酸和 qpcr 探针设计工具,包括 OligoArchitect? 引物和探针设计解决方案以及 OligoEvaluator?:寡核苷酸序列计算器。 定制DNA 和 RNA 寡核苷酸及 qPCR 探针产品资源 查看我们的定制预设计 DNA 寡核苷酸、RNA 寡核苷酸和 qPCR 探针产品和技术资源,包括在线工具、https://www.sigmaaldrich.cn/CN/zh/products/molecular-biology-and-functional-genomics/oligos-and-qpcr-probes/custom-predesigned-dna-oligos-and-qpcr-probes
7.阳性克隆筛选方法汇总——基于ZFNTALENCRISPR/Cas9基因敲除近几年来,基因重组的技术层出不穷,包括TALEN和CRISPR/Cas9在内的重组技术给基础研究提供更为方便和快捷的分子生物学工具。 关于这些技术的具体原理和操作细节,这里不做展开介绍,主要谈一谈在用这些技术进行细胞株构建的过程中,如何做才能加快阳性克隆筛选的步伐,做好这个关键的步骤。 https://www.biodiscover.com/reaseach/116765.html
8.CRISPR基因敲除实验指南公司新闻转染48 小时后,从第一个平板上提取基因组 DNA 进行基因组分析。从实验细胞和对照细胞中扩增靶点周围的 DNA 区域,并合成相应引物以进行 Sanger 测序。 在测序之后,我们建议使用 Synthego 的 CRISPR Edits(ICE)在线工具来分析扩增产物。有关如何提取 DNA、执行 PCR 和准备 Sanger 测序用扩增子的说明,请参见 Synthegohttps://sbsbio.biomart.cn/news/2910283.htm
9.基因编辑资源中心金斯瑞提供CRISPR gRNA文库、sgRNA、ssDNA等定制试剂支持您的基因编辑研究,同时提供专业gRNA设计工具、实验操作手册、在线专家讲座,助力您高效快速的开展实验。https://www.genscript.com.cn/gene-editing-resource-center.html
10.GeneiousPrime2022破解版GeneiousPrime2023.1w友好的直观界面,包含用于Sanger,NGS和长读序列分析的基本基因组学工具,包括成对和多重比对,从头组装,作图,表达分析,变体调用,NGS可视化,序列和色谱图分析,自动注释,以及系统树的构建。 2、分子生物学 在一个界面中执行各种克隆和引物设计操作。自动注释质粒图谱和表达载体。模拟各种分子克隆操作,包括限制性克隆,Gibsonhttp://www.sd173.com/soft/9265.html
11.CRISPR/Cas9载体设计与构建的作用机理CRISPR/Cas9 载体设计与构建方法2:根据NtDXR 基因序列,利用在线工具ZiFiT Targeter Version4.2:选择合适的靶位点,筛选要求为:①靶位点主要包括20 个碱基,并且这20 个碱基后面是NGG(N 为任意碱基)3 个碱基的PAM 区(Protospacer adjacent motif,PAM);②靶位点尽量选择在基因编码区的前端。依据靶位点设计原则设计引物https://www.chemicalbook.com/NewsInfo_5909.htm
12.如何正确设计引物?pcr引物设计详细步骤7. 引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列**有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。 8. 引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。 9. 学会使用软件:PP5,Oligo6,DNAstar,Vector NTI,primer3(这个在线设计**用)。 https://www.magigen.com/how-to-design-pcr-primer.html
13.引物设计哪家公司好Abcam现提供CRISPR/Cas9敲除细胞系,Sanger测序验证。 Invitrogen 在线设计引物-赛默飞 Invitrogen引物合成,独特的质检工艺,CE, MS及OD检测相结合,完整严谨的纯化工艺,完善便捷的在线引物订购系统,点此即刻开始在线订购! Invitrogen 如何设计mirna引物-赛默飞 Invitrogen引物合成服务,专注引物合成20多年,合成仪器多样化,https://wenda.so.com/q/1684200713215742
14.dharmaconCRISPRGuideRNAAmresco官网定制合成100-mer单指导RNA,输入您自己的设计或使用我们灵活的设计工具 Edit-R合成阳性crRNA控制和检测引物 针对特征良好的基因的物种特异性crRNA,以及错配检测分析引物,以确定基因编辑条件对大效率的有效性。 Edit-R合成crRNA非靶向对照 非靶向对照以在缺乏基因靶特异性crRNA的情况下评估对CRISPR-Cas9组分的细胞应答。 http://www.jinpanlab.cn/archives/105007.html
15.RPA引物设计深圳易致生物科技有限公司,基于DNA/RNA快速扩增技术,设计、研发与转化病原微生物快速检测产品。拳头产品:超敏胰岛素ELISA试剂盒,支原体检测试纸条,支原体清除剂,支原体预防剂,恒温PCR,CRISPR,Cas12a, Cas13ahttps://ezassay.com/primer
16.(1)引物设计:利用在线网站CRISPOR ( CRISPOR (citation) is a program that helps design, evaluate and clone guide sequences for the CRISPR/Cas9 system.CRISPOR Manual Nov 27, 2024: A one day downtime occurred, sorry. The server is catching up today on submitted jobs. SeeFull list of changeshttp://crispor.tefor.net/
17.一种CRISPR/Cas9介导的植物多基因编辑载体的构建方法和应用.pdf[0010](A)根据基因靶位点序列,通过CRISPR?GE网站在线设计靶序列,合成引物,引物以 pGTR(Xie et al.ProcNatlAcadSciUSA,2015,112:3570?3575)为模板扩增出带有不同靶标 序列的tRNA?gRNA单元; [0011]所述根据靶序列合成的引物序列特征如下所示: [0012]gRNA[x]?F(SEQ ID NO.5): [0013] [0014]gRNhttps://m.book118.com/html/2024/0316/5133140110011123.shtm
18.锐博生物提供一站式RNA与DNA设计定制锐博生物我们提供行业领先的RNAi、CRISPR-Cas9、miRNA、特殊Oligo、阴性/阳性对照、FISH探针、ChIRP探针、qPCR引物等丰富的定制服务,均可通过如下途径在线定制下单。(人、小鼠、大鼠以外的物种或化学修饰,均为10nmol起订) *订单提交步骤:1.进入页面:填写物种、基因名或ID或转录本、纯化方式、修饰等 —— 2.加入购物车(可依https://www.ribobio.com/service-and-support/one-stop-rna-dna-custom-service/
19.AprotocolforCRISPR/Cas9basedmulti为了方便CRISPR/Cas9的靶位点设计, 载体构建, 以及突变靶点测序分析, 本实验室还开发了配套的一站式在线软件工具包CRISPR-GE (http://skl.scau.edu.cn/). CRISPR-GE由5个独立和关联的子程序构成, 包括从参考基因组下载任意区段序列的“seqDownload”, 进行靶点设计的“targetDesign”, 对潜在脱靶位点评估的“ofhttps://engine.scichina.com/doi/10.1360/N052018-00069
20.寡核苷酸工具和应用中心ThermoFisherScientific设计 GeneAssist拷贝数分析工作流生成器 设计您自己的Custom和Custom Plus拷贝数分析 打开 测序 最热门 搜索 Ion AmpliSeq NGS panels 浏览用于SNP、CNV、基因融合和插入缺失检测的寡核苷酸引物对的panel 打开 搜索 用于Sanger测序的引物设计工具 搜索我们包含大约650,000个预设计引物对的数据库,以对人类外显子组https://www.thermofisher.com/cn/zh/home/life-science/oligonucleotides-primers-probes-genes/oligos-tools-utilities
21.科学网—Microbiome:华中农大谢卡斌组利用CRISPR系统改进16SrRNA宿主特异性gRNA对Cas-16S-seq至关重要,我们以前期CRISPR-Plant所使用的gRNA设计工具为基础,通过比较植物和细菌的16S rRNA基因序列,设计出了分别靶向水稻线粒体和叶绿体的不同高特异性的mt-gRNAs和cp-gRNAs,并且也建立了一整套的生物信息学流程以供在其他植物物种中参考使用。由于宿主特异性gRNAs的设计是基于已知的16Shttps://wap.sciencenet.cn/home.php?mod=space&uid=3334560&do=blog&id=1237160